求助 固体培养基上的菌落,无法用液体培养基扩增
2017-06-23
问题描述:
大家好,我是一个质粒小菜鸟,最近遇到个奇怪的事情,希望大家帮忙看看,究竟出了什么问题。
我构建了一个氨苄抗性的质粒,这个质粒在固体培养基里长出了单菌落,但是我挑菌在液体培养基里无法扩增出来。固体培养基和液体培养基一起配置的,氨苄浓度一致,唯一不同的是固体培养基里加入了琼脂。为了防止是氨苄的问题,我把这个固体培养基上的菌落挑划了新的板,依然能长出菌落。而同一次配置的液体培养基,也能扩增其他质粒,所以我实在想不出是什么其他问题,希望大家帮帮忙。
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dxy_mc067er5
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质粒有没有导入感受态细胞?
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dxy_mc067er5
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你直接用质粒在固体培养基培养的?你有没有进行连接转化?
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念123
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固体琼脂板氨苄的问题。氨苄高温会失效
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qq890914
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展开引用寻影大家好,我是一个质粒小菜鸟,最近遇到个奇怪的事情,希望大家帮忙看看,究竟出了什么问题。我构建了一个氨苄抗性的质粒,这个质粒在固体培养基里长出了单菌落,但是我挑菌在液体培养基里无法扩增出来。固体培养基和液体培养基一起配置的,氨苄浓度一致,唯一不同的是固体培养基里加入了琼脂。为了防止是氨苄的问题,我把这个固体培养基上的菌落挑划了新的板,依然能长出菌落。而同一次配置的液体培养基,也能扩增其他质粒,所以我实在想不出是什么其他问题,希望大家帮帮忙。......平板怎么倒的?配置好高压后,等冷却再加抗生素?还是高压前加的?
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寻影
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dxy_mc067er5质粒有没有导入感受态细胞?这个是用氨苄筛选,长出来应该就是导入了(>﹏<)
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寻影
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dxy_mc067er5你直接用质粒在固体培养基培养的?你有没有进行连接转化?进行连接转化了呀,DH5菌
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寻影
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念123固体琼脂板氨苄的问题。氨苄高温会失效可是,作对照的那个板上一个菌都没有(>﹏<)
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dxy_mc067er5
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寻影可是,作对照的那个板上一个菌都没有(>﹏<)进行酶切验证
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寻影
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dxy_mc067er5进行酶切验证可是无法用液体培养基扩增呀(>﹏<)怎么酶切验证呢?
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duxiaoye
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我猜是你挑菌的时候,接种证还没冷就去挑菌了,活活烫死了(〜 ̄▽ ̄)〜
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